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PCR實(shí)驗(yàn)室功能設(shè)備及裝修注意事項(xiàng)

11.02.2021
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PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū),樣品制備區(qū),擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域,并設(shè)有專(zhuān)用走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū),即從:試劑準(zhǔn)備區(qū)——樣品制備區(qū)——PCR擴(kuò)增室——產(chǎn)物分析室,不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)頂部應(yīng)該安裝紫外燈,紫外燈波長(zhǎng)為254mm,每20㎡一支40W的紫外燈。

  
一、實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備

1. 試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進(jìn)行試劑的制備,分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平,冰箱,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。對(duì)于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求,一般為+10Pa。

2. 樣品制備區(qū):主要進(jìn)行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱,生物安全柜,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,一般為+10Pa。

3. 擴(kuò)增區(qū):主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板(來(lái)自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有:擴(kuò)增儀,冰箱,離心機(jī),加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為-25Pa。

4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀,洗板機(jī).加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,一般為-25Pa,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域



二、PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制


各區(qū)域之間應(yīng)具備單間的實(shí)驗(yàn)工藝流,物流,人流與氣流,形成單向流程的保護(hù)屏障,避免實(shí)驗(yàn)室之間的相互干擾,防止氣溶膠擴(kuò)散對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染。

PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴(yán)格控制送,排風(fēng)的比例以保證個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

三、PCR實(shí)驗(yàn)室裝飾

實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固,氣密性好;所有陰陽(yáng)角宜采用圓弧過(guò)度;墻體內(nèi)壁光潔,不積塵,耐腐蝕,易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹(shù)脂自流坪,材料應(yīng)滿足無(wú)縫隙,無(wú)滲漏,光潔,耐腐蝕的要求。

四、PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)

1.幾個(gè)區(qū)域的大小設(shè)置情況,試劑準(zhǔn)備區(qū),擴(kuò)增區(qū),擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),空間可以相對(duì)小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應(yīng)大一些。

2.試劑準(zhǔn)備區(qū),樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。
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